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荸薺皮中總黃酮和荸薺中多糖抗氧化活性研究

更新時間:2018-11-08點擊次數:2160

      首先喆圖小編來給大家講講荸薺, 又名馬蹄、水栗、芍、鳧茈、烏芋、菩薺、地梨,是莎草科荸薺屬一種屬于多年生淺水性草本植物。我國荸薺的產量占世界的95%以上,長江流域以南各省均有大量栽培,是一種重要的水生植物。

      荸薺皮作為荸薺加工及食用后的下腳料,占鮮荸薺質量的25%左右,資源量很大,然而絕大多數以廢物的形式丟棄或作為農戶肥料,造成環境污染和資源的極大浪費。黃酮是具有酚羥基的一類還原性化合物,在復雜反應體系中,由于其自身被氧化而具有抗氧化作用。凡符合高分子化合物概念的碳水化合物及其衍生物均稱為多糖。

       而在荸薺肉和荸薺皮中含有豐富的多糖類化合物與黃酮類化合物。目前,對于提取植物中黃酮類化合物的方法有好多種,接下來為了有效開發和利用荸薺原料、減輕環保壓力,提供一種簡單、有效的方法,實驗所需材料如下:

1、購買新鮮荸薺,削皮把皮和肉分裝處理好備用。

2、荸薺皮:收集新鮮荸薺, 剔除雜質及腐跡, 于鼓風干燥箱中80 ℃烘6 h , 再用粉碎機粉碎備用。

3、荸薺肉:收集新鮮荸薺肉切碎,于鼓風干燥箱中烘干,再用粉碎機粉碎備用。

所需試劑與儀器:

     蘆丁標準品、無水乙醇、無水甲醇、苯酚、葡萄糖、濃硫酸、丙酮、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、水楊酸、過氧化氫、 三羥甲基氨基甲烷、鹽酸、鄰苯三酚(焦性沒食子酸)、1,1 - 二苯基-2- 苦基苯肼。蒸餾水、去離子水。 粉碎機、離心機、旋轉蒸發器、電熱恒溫水浴鍋鼓風干燥箱、25ml比色管、50 mL 容量瓶、100ml容量瓶、移液管、電子天平、超聲清洗器、分光光度計、10ml試管。

      肉中多糖提取: 超聲輔助提取法:蒸餾水(料液比1:25),預熱10min,超聲20min,超聲功率80W,提取溫度60℃,離心并收集長層清液,加入95%的乙醇使乙醇含量達到 70%以上然后靜置沉淀。離心收集沉淀,用無水甲醇,以除去水分和雜質,然后晾干備用。

  皮中黃酮提取   

      乙醇提取法:乙醇60% 超聲提取50min。取荸薺皮20g,料液比1:12 提取溫度60℃離心后收集上層清液,用旋轉蒸發儀蒸干后,加水溶解,溶解*后轉移至容量瓶中。

實驗方法:溶液含量測定及溶液配制

     樣品溶液含量測定:分別采用蘆丁標準曲線法、苯酚-硫酸葡萄糖標準曲線法測定樣品溶液里面黃酮與多糖的含量。

黃酮溶液:把黃酮溶解液配成25ml一定濃度梯度。(0.1,0.2,0.4,0.6,0.8 mg/ml)

多糖溶液:配成與黃酮等濃度梯度的多糖溶液。(0.1,0.2,0.4,0.6,0.8 mg/ml)

實驗操作:

    1、 取5支試管加入不同濃度梯度溶液1 mL,再加入3 mL 濃度為0.04 mg/mL的DPPH 溶液,混合均勻,于室溫下避光放置40min,在波長517 nm 處測其吸光度為A1;另各取1 mL 2.4.1溶液于試管中,分別加入無水乙醇3mL,于室溫下避光放置40 min,在波長517 nm 處測其吸光度為A2;以3 mL 0.04 mg/mL DPPH 和1mL 無水乙醇反應做為參比,其吸光度記為A0
     2、 清除羥基自由基能力測定 Fenton反應產生羥基自由基,H2O2/Fe2+體系通過Fenton反應產生羥基自由基 化學反應式如:H2O2+Fe2+ →·OH+OH+ Fe3+ ·OH氧化水楊酸會產生有色物質,該物質在510nm處有強吸收峰,若體系 9 里面加入清除·OH的活性物質,則就減少有色物質生成,吸光度值就會降低,吸光度值越低清除·OH效果就越好。

實驗操作:

     1、取6支25ml比色管,并依次編號,每支比色管各加入9mmol/LFeSO41ml, 9mmol/L水楊酸-乙醇溶液2ml,按試管編號各加入不同濃度的標題2.4.1溶液2ml,后加入8.8mmol/L H2O22ml啟動反應,用去離子水定容至刻度,于室溫下反應1h。以去離子水代替溶液作空白對照,在510nm處測定樣品的吸光度,記錄數據。
清除超氧陰離子能力測定 對超氧陰離子的清除作用,鄰苯三酚自氧化反應方法 :

實驗操作: 取8支洗凈干燥的25 mL比色管依次按照步驟加入

步:編號后依次加入5 mL 25℃預熱20min的pH= 8.2濃度為0.05mol/L 的Tris-HCL緩沖液;

第二步:在3-8號加入5 mL標題2.4.1溶液;

第三步:在2-8號加入2.5mL 在25℃下預熱20 min濃度為0.5 mmol·L-1 的鄰苯三酚溶液;

第四步:然后用去離子水定容至刻度。

第五步:在波長為325 nm下每隔30 s測1次吸光值。以1 號比色管作為空白。記錄數據

      以上內容為荸薺在食品和藥品領域的有效應用提供理論參考,如需了解詳情請聯系喆圖客服!

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